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5-甲基四氢叶酸是叶酸非常具有生物活性和功能的形式，是叶酸参与生理代谢的主要途径，也是出现在血浆和细胞游离叶酸存在的主要形式。
5-甲基四氢叶酸主要用于药物活性成分和食品添加剂中，有预防胎儿神经管缺陷、动脉硬化，治疗巨幼红细胞性贫血，增强氟化嘧啶的效果。另外孕激素和5-甲基四氢叶酸联合用药在治疗子宫内膜异位症并同时减轻其副作用以及降低怀孕期间的先天畸形的风险等方面有着很多应用。
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